永劫无间中有多位特色鲜明的英雄，每个英雄都有独特的技能和定位。土御门胡桃是游戏中的支援型角色，标签为奶妈辅助，难度一颗星，适合新手使用。她的技能主要为团队增益，拥有治疗和伤害能力，可以协助队友恢复体力并在队友阵亡时将其拉回团队。胡桃的大招能释放恢复法阵，为队友提供体力恢复和抵御减益状态的能力，多余的体力还能转化为护甲。她的操作简单，但团队作用非常大，尤其在多人模式中表现突出。
迦南是另一位高人气英雄，定位为刺客，技能灵活且爆发力强。她以高机动性和隐身机制著称，能在战斗中快速切入或脱离战场。迦南的大招隐身能让敌人索敌失效，生存能力极强，适合喜欢突袭和游击战术的玩家。她的技能设计偏向于单点爆发，适合在混乱的战场中寻找机会收割残血敌人。迦南的玩法需要一定的操作技巧，但熟练掌握后能在单排和三排中发挥巨大作用。
天海是团队中的前排担当，俗称和尚，拥有强大的防御和控场能力。他的金钟罩技能能反弹伤害、振刀或击飞敌人，奥义金刚伏魔可让他变身为大佛，回满血量并抓取敌人。天海在团战中能吸收大量伤害并为队友创造输出空间，尤其适合配合高爆发英雄。他的大招持续时间长，威慑力强，敌人通常会选择避战。天海的操作难度适中，但需要良好的时机判断能力。
季沧海被称为火男，是输出型英雄的代表。他的技能附带灼烧效果，能对敌人造成持续伤害。季沧海的机动性较高，擅长近战爆发，技能可免疫部分伤害并强化自身攻击。他的玩法偏向激进，适合喜欢正面作战的玩家。火男在单挑中表现优异，但在团战中需要队友配合才能发挥最大作用。他的技能连招流畅，打击感强，操作上限较高。宁红夜拥有群体眩晕技能，能在团战中打乱敌方阵型；特木尔（沙男）的大招沙尘暴能分割战场并限制敌人行动。
